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微生物限度檢查|制備百科

發(fā)布時(shí)間:2024-09-20   點(diǎn)擊次數(shù):7480次

微生物限度檢查法的供試液制備方法有哪些

     微生物限度檢查法必須用到供試液,那么如何制備供試液呢?可根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性,采取適宜的方法制備供試液,常用的供試液制備方法如下:
    一、液體供試品
      取供試品10ml,加PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,混勻,作為1:10的供試液。油劑可加入適量的無(wú)菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

    二、固體、半固體或黏稠性供試品 
       取供試品10g,加PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,用勻漿儀或其他適宜的方法,混勻,作為1:10的供試液。必要時(shí)加適量的無(wú)菌聚山梨酯80,并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。

    三、需用特殊供試液制備方法的供試品
     1、非水溶性供試品
       方法1:取供試品5g(5ml),加入含溶化的(溫度不超過(guò)45℃)5g司盤(pán)80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無(wú)菌混合物的燒杯中,用無(wú)菌玻棒攪拌成團(tuán)后,慢慢加入45℃左右的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,邊加邊攪拌,使供試品充分乳化,作為1:20的供試液。
       方法2:取供試品10g,加至含20ml無(wú)菌十四烷酸異丙酯(制法見(jiàn)附錄XIII B無(wú)菌檢查法中供試品的無(wú)菌檢查項(xiàng)下)和無(wú)菌玻璃珠的適宜容器中 ,必要時(shí)可增加十四烷酸異丙酯的用量,充分振搖,使供試品溶解。然后加入45℃的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml,振搖5~10分鐘,萃取,靜置使油水明顯分層,取其水層作為1:10的供試液。
     2、膜劑供試品
      取供試品100cm2,剪碎,加50ml或100ml的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(必要時(shí)可增加稀釋液),浸泡,振搖,作為1:10或1:20的供試液。
     3、腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品
      取供試品10g ,加pH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)PH7.6無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(用于結(jié)腸溶制劑)至100ml,置45℃水浴中,振搖,使溶解,作為1:10的供試液。
     4、氣霧劑、噴霧劑供試品
      取規(guī)定量供試品,置冰凍室冷凍約1小時(shí),取出,迅速消毒供試品開(kāi)啟部位,用無(wú)菌鋼錐在該部位鉆一小孔,放至室溫,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器,使拋射劑緩緩全部釋出。用無(wú)菌注射器吸出全部藥液,加至適量的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(若含非水溶性成分,加適量的無(wú)菌聚山梨酯80)中,混勻,取相當(dāng)于10g或10ml的供試品,再稀釋成1:10的供試液。
     5、具抑菌活性的供試品
      當(dāng)供試品有抑菌活性時(shí),應(yīng)消除供試液的抑菌活性后,再依法檢查。
     (1)培養(yǎng)基稀釋法:取規(guī)定量的供試液,至較大量的培養(yǎng)基中,使單位體積內(nèi)的供試品含量減少,至不含抑菌作用。測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí),取同稀釋級(jí)的供試液2ml,每1ml供試液可等量分注多個(gè)平皿,傾注瓊脂培養(yǎng)基,混勻,凝固,培養(yǎng),計(jì)數(shù)。每1ml供試液所注的平皿中生長(zhǎng)的菌數(shù)之和即為1ml的菌落數(shù),計(jì)算每1ml供試液的平均菌落數(shù),按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù);控制菌檢查時(shí),可加大增菌培養(yǎng)基的用量。
     (2)離心沉淀集菌法:取一定量的供試液,3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘(供試液如有沉淀,先以500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,取全部上清液再離心),棄去上清液,留底部集菌液約2ml,加稀釋液補(bǔ)至原量。
     (3)薄膜過(guò)濾法:見(jiàn)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的“薄膜過(guò)濾法”。
     (4)中和法:凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品,可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養(yǎng)基中。


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